Estabilidad de ELISA ≤ ± 0,003Abs Probador de micotoxinas ST-2000A Rango de longitud de onda 400-900nm

Probador de micotoxinas ST-2000A

El analizador de micotoxinas ST-2000A es un instrumento analítico necesario para el ensayo inmunoabsorbente ligado a aflatoxinas y enzimáticos. El principio del ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) en fase sólida, es decir, el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), se compone de este instrumento y el kit B1, que se puede utilizar para determinar el contenido de aflatoxina B1 y otras micotoxinas en muestras. de forma limitada y cuantitativa (si se equipa con otros kits, se pueden detectar otras toxinas). Se utiliza ampliamente en la detección de aflatoxina B1 y otras micotoxinas en alimentos, piensos, aceites, productos lácteos, medicamentos, bebidas, vino y otros productos.

Características de rendimiento:

1. Operación de pantalla: pantalla LCD en color, tablero de distribución de videoteléfono, visualización de información completa de la placa, operación de pantalla táctil

2. Función de placa vibratoria: Velocidad de placa vibratoria de nivel 3, tiempo ajustable de 0 a 255 segundos

3. Estación de trabajo: software profesional de marcador enzimático, que puede almacenar 500 grupos de programas, 100.000 resultados de muestras y proporcionar modos de cálculo enriquecidos como absorbancia, ecuación lineal, ecuación logarítmica, ecuación cuadrática, ecuación cúbica, ecuación logarítmica de concentración porcentual de absorbancia, spline. función, tasa de inhibición, etc.

Parámetros técnicos:

Fuente de luz: lámpara halógena importada DC12V 22W

Rango de longitud de onda: 400-900 nm

Filtro: 405, 450, 492, 630 nm como estándar, otras longitudes de onda opcionales

Rango de lectura: 0－4.000Abs

Resolución: 0,001 Abs

Error de indicación: ≤±0.01Abs

Estabilidad: ≤±0.003Abs

Repetibilidad: ≤ 0,3%

Tamaño: 400 mm × 260 mm × 200 mm

1 Principio y aplicación

Este kit utiliza el método ELISA competitivo indirecto para detectar la aflatoxina B1 (AFB1) en cereales, piensos y otras muestras. El kit se compone de una placa marcada con enzimas prerecubierta con antígeno de acoplamiento, marcador enzimático de rábano picante, anticuerpo, estándar y otros reactivos compatibles. Durante la prueba, agregue la solución estándar o de muestra, la aflatoxina B1 en la muestra y la placa de enzimas se recubren previamente con el antígeno conjugado para competir por el anticuerpo anti-aflatoxina B1. Después de agregar el marcador enzimático, use el sustrato TMB para desarrollar el color. El valor de absorbancia de la muestra se correlaciona negativamente con el contenido de aflatoxina B1 contenida en la muestra. La cantidad residual de aflatoxina B1 en la muestra se puede obtener comparándola con la curva estándar.

2 indicadores técnicos

2.1 Sensibilidad del kit: 0,03 ppb (ng/ml)

2.2 Modo de reacción: 25 ℃, 30 min ~ 15 min

2.3 Límite inferior de detección:

Cereales................................................. ..... 0,15 ppb

Alimento con fórmula................................... 0,3 ppb

Aceite comestible, maní................................ 0.6ppb

Salsa de soja, trigo y otros piensos................................ 0,3 ppb

Cerveza................................................ 0,3 ppb

Vino, salsa de soja, vinagre................................ 0,15ppb

2.4 Tasa de reacción cruzada:

Aflatoxina B1 100%

2.5 Tasa de recuperación de muestras:

Cereales y piensos preparados................................ 85% ± 15%

Maní................................. 82 ± 15%

Aceite comestible................................ 85 ± 15%

Salsa de soja, trigo y otros piensos................................ 83 ± 15%

Cerveza................................ 84 ± 15%

Vino, salsa de soja, vinagre............ 87 ± 15%

3 Composición del kit

Placa marcadora enzimática................................ 96 agujeros

Solución estándar (cubierta negra): 1 ml cada una

0 ppb, 0,03 ppb, 0,06 ppb, 0,12 ppb, 0,24 ppb, 0,48 ppb

Solución de alto estándar: 100ppb................................ 1ml

Marcador enzimático (tapa roja)................................. 5,5 ml

Solución de trabajo de anticuerpos (tapa azul)................................. 5,5 ml

Solución de sustrato A (tapa blanca)................................. 6ml

Sustrato líquido B (tapa negra)................................. 6ml

Solución de terminación (tapa amarilla)................................. 6ml

Solución de lavado concentrada 20X (cubierta blanca).................... 40ml

Manual de instrucciones.................1copia

4 Equipos y reactivos necesarios

4.1 Aparatos: analizador de aflatoxinas, impresora, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, oscilador, centrífuga, pipeta graduada, balanza (sensibilidad 0,01 g)

4.2 Micropipeta: monocanal 20 µl-200 µl, 100 µl-1000 µl, multicanal 300 µl

4.3 Reactivo: metanol, n-hexano, triclorometano o diclorometano

5 Pretratamiento de muestra

5.1 Instrucciones antes del procesamiento de muestras:

El aparato experimental debe estar limpio y utilizar un cabezal de succión desechable para evitar contaminación e interferencia con los resultados experimentales.

5.2 Preparación de la solución:

Solución 1: extracto de muestra

70% de metanol, es decir, V metanol: V agua desionizada＝7:3.

5.3 Ejemplos de pasos de pretratamiento:

5.3.1 Método de procesamiento de granos

1) Pesar 2 g de muestra triturada en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregar 5 ml de solución de extracción de muestra, agitar durante 5 minutos, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 minutos de centro de separación;

2) Tome 0,5 ml de sobrenadante, agregue 0,5 ml de agua desionizada y mezcle bien;

3) Tome un análisis de 50 μl.

Proporción de dilución de la muestra: 5 Límite de detección inferior: 0,15 ppb

5.3.2 Métodos de procesamiento para muestras con fuerte absorción de agua, como cáscara de maíz y salvado de trigo.

1) Pesar 2 g de muestra triturada en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregar 20 ml de solución de extracción de muestra, agitar durante 5 minutos, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 minutos de centro de separación;

2) Tome 0,5 ml de sobrenadante, agregue 0,5 ml de agua desionizada y mezcle bien; (Para la muestra con un contenido de toxina extremadamente alto, se puede diluir con metanol al 35 % y luego analizarla. Por ejemplo, tome 0,1 ml de la solución mezclada en 2) y 0,9 ml de metanol al 35 % para mezclar. La proporción de dilución de la muestra final es 200 y el límite de detección es 6 ppb).

3) Tome un análisis de 50 μl.

Proporción de dilución de la muestra: 20 Límite de detección inferior: 0,6 ppb

Nota: Debido a que la distribución de la toxina en la muestra es desigual, es necesario tomar muestras de múltiples puntos y mezclarlas completamente antes de tomar 2 g para la prueba.

5.3.3 Método de procesamiento de piensos preparados

1) Pesar 2 g de muestra triturada en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregar 10 ml de solución de extracción de muestra, agitar durante 5 minutos, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 minutos de centro de separación;

2) Tome 0,5 ml de sobrenadante, agregue 0,5 ml de agua desionizada y mezcle bien;

3) Tome un análisis de 50 μl.

Proporción de dilución de la muestra: 10 Límite de detección inferior: 0,3 ppb

5.3.4 Métodos de tratamiento de piensos con aceite comestible, maní y alto contenido de grasa

1) Pesar 2 g de muestra triturada en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregar 8 ml de n-hexano y 10 ml de solución de extracción de muestra, agitar durante 5 minutos, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 minutos del centro de separación;

2) Retire el líquido superior, tome 0,5 ml del líquido inferior y agregue 0,5 ml de agua desionizada, mezcle bien, luego tome 0,5 ml del líquido mezclado y agregue 0,5 ml de metanol al 35%, agite durante 30 segundos;

3) Tome un análisis de 50 μl.

Proporción de dilución de la muestra: 20 Límite de detección inferior: 0,6 ppb

5.3.5 Alimentos o condimentos como salsas, trigo, galletas, pasteles y métodos de procesamiento de piensos como el concentrado de piensos.

1) Pesar 2 g de muestra triturada en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregar 10 ml de solución de extracción de muestra, agitar durante 5 minutos, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 minutos de centro de separación;

2) Tomar 2ml de sobrenadante, agregar 4ml de triclorometano (o diclorometano), agitar durante 5 minutos, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 minutos de centro de separación;

3) Transfiera el líquido superior a otro recipiente, deje el líquido inferior en espera, agregue otros 4 ml de cloroformo (o diclorometano) al líquido superior, agite completamente y mezcle durante 5 minutos, y la temperatura ambiente es de 4000 rpm/centro de separación durante 10 minutos;

4) Retire el líquido superior, combine el líquido inferior dos veces y mezcle completamente;

5) Tome 2 ml del líquido inferior combinado y séquelo con nitrógeno a 50-60 ℃;

6) Agregue 0,5 ml de extracto de muestra para disolver completamente la sustancia seca y luego agregue 0,5 ml de agua desionizada para mezclar;

7) Tome un análisis de 50 μl.

Proporción de dilución de la muestra: 10 Límite de detección inferior: 0,3 ppb

5.3.6 Método de procesamiento de cerveza

1) Revuelva completamente la cerveza (elimine el CO2), tome 2 ml de muestra de cerveza, agregue 1 ml de agua destilada, agregue 7 ml de metanol y agite durante 5 minutos;

2) Tome 0,5 ml de solución de muestra mezclada y agregue 0,5 ml de agua desionizada para mezclar bien;

3) Tome un análisis de 50 μl.

Proporción de dilución de la muestra: 10 Límite de detección inferior: 0,3 ppb

5.3.7 Método de tratamiento del vino, salsa de soja y vinagre.

1) Tomar 2ml de muestra, agregar 2ml de agua destilada, agregar 10ml de triclorometano (o diclorometano), agitar durante 5 minutos, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 minutos de centro de separación;

2) Tome 1 ml del líquido inferior y séquelo con nitrógeno a 50-60 ℃;

3) Agregue 0,5 ml de extracto de muestra para disolver completamente la sustancia seca, luego agregue 0,5 ml de agua desionizada y mezcle bien;

5) Tome un análisis de 50 μl.

Proporción de dilución de la muestra: 5 Límite de detección inferior: 0,15 ppb

6 pasos de ELISA

Saque el reactivo requerido del ambiente de almacenamiento en frío a 4 ℃ y colóquelo a temperatura ambiente durante más de 30 minutos. Es posible que haya cristales que deban restaurarse a temperatura ambiente para que se disuelvan por completo cuando la solución de lavado se almacene en frío. Cada reactivo líquido debe agitarse antes de su uso. Saque la cantidad requerida de placas y marcos microporosos, coloque las placas microporosas no utilizadas en bolsas autosellantes y guárdelas a 2-8 ℃.

Antes del experimento, la solución de lavado concentrada se diluye 20 veces en la solución de lavado de trabajo 20 veces.

6.1 Numeración: numere los pocillos correspondientes de la muestra y el estándar en secuencia, haga dos orificios paralelos para cada muestra y estándar, y registre la posición del orificio estándar y del orificio de la muestra.

6.2 Reacción de adición de muestra: agregue 50 µl/pocillo de estándar o muestra en sus respectivos pocillos, luego agregue 50 µl/pocillo de marcador enzimático, luego agregue 50 µl/pocillo de solución de trabajo de anticuerpo, selle la placa con una tapa membrana, agitar suavemente durante 5 segundos, mezclar y reaccionar a 25 ℃ durante 30 minutos.

6.3 Lavado: Retire con cuidado la membrana de la placa de cubierta, seque el líquido en el orificio, lave completamente el orificio con solución de lavado de trabajo de 250 µl/orificio durante 5 veces, con un intervalo de 30 segundos, y séquelo con papel absorbente (el Las burbujas que no se eliminan después de la palmadita se pueden perforar con un cabezal de pistola limpio).

6.4 Desarrollo del color: agregue 50 µl de solución de sustrato A y 50 µl de solución de sustrato B a cada orificio, agite suavemente durante 5 segundos, mezcle bien y desarrolle el color en la oscuridad a 25 ℃ durante 15 minutos.

6.5 Terminación: agregue 50 µl de solución de terminación a cada orificio, agite suavemente y mezcle bien para terminar la reacción.

6.6 Medición del valor de absorbancia: use el probador de aflatoxinas para medir el valor de absorbancia de cada orificio a 450 nm (se recomienda una longitud de onda dual de 450/630 nm). La determinación deberá completarse dentro de los 10 minutos posteriores a la finalización de la reacción.

6.7 El probador automático de aflatoxinas ST-2000A completa automáticamente la determinación y produce los resultados automáticamente.