Tester de micotoxinas ELISA longitud de onda 400 - 999nm Detección de aflatoxina B1 ST-2000A

Estudio de micotoxinas ST-2000A

El analizador de micotoxinas ST-2000A es un instrumento analítico necesario para el ensayo de aflatoxinas e inmunosorbentes ligados a enzimas.Es decir, ensayo de inmunosorbción ligado a enzimas (ELISA), está compuesto por este instrumento y el kit B1,que puede utilizarse para determinar el contenido de aflatoxina B1 y otras micotoxinas en muestras de manera limitada y cuantitativa (si está equipado con otros kits)Se utiliza ampliamente en la detección de aflatoxina B1 y otras micotoxinas en alimentos, piensos, aceite, productos lácteos, medicamentos, bebidas, vino y otros productos.

Características de rendimiento:

1Función de la pantalla: pantalla LCD a color, tablero de distribución por videofono, pantalla de toda la información de la tabla, funcionamiento de la pantalla táctil

2Función de la placa de vibración: velocidad de la placa de vibración de nivel 3, tiempo 0-255 segundos ajustable

3Estación de trabajo: software profesional de marcadores enzimáticos, que puede almacenar 500 grupos de programas, 100000 resultados de muestras y proporcionar modos de cálculo ricos como absorbancia, ecuación lineal,ecuación logarítmica, ecuación cuadrática, ecuación cúbica, absorbancia porcentaje de concentración ecuación logarítmica, función de spline, tasa de inhibición, etc.

Parámetros técnicos:

1 Principio y aplicación

Este kit utiliza el método ELISA indirecto competitivo para detectar aflatoxina B1 (AFB1) en granos, piensos y otras muestras.marcador de enzimas de rábano picante, anticuerpos, reactivos estándar y otros reagentes de correspondencia.la aflatoxina B1 de la muestra y la placa enzimática están pre-revestidas con el antígeno conjugado para competir por el anticuerpo antiaflatoxina B1Después de añadir el marcador enzimático, se utiliza el sustrato TMB para desarrollar el color. El valor de absorbancia de la muestra se correlaciona negativamente con el contenido de aflatoxina B1 contenida en la muestra.La cantidad residual de aflatoxina B1 en la muestra se puede obtener comparando con la curva estándar.

2 Indicadores técnicos

2.1 Sensibilidad del kit: 0,03 ppm (ng/ml)

2.2 Modo de reacción: 25 °C, 30 minutos ~ 15 minutos

2.3 Límite inferior de detección:

Cereales 0,15 ppm

Comida para piensos para piensos de fórmula

Aceite comestible de cacahuete 0,6 ppm

Salsa de soja, trigo y otros piensos

Cerveza: 0,3 ppb

Vino, salsa de soja, vinagre 0,15 ppm

2.4 Velocidad de reacción cruzada:

Aflatoxina B1 100%

2.5 Tasa de recuperación de las muestras:

Cereales y piensos para piensos para niños 85% ± 15%

El aceite de oliva es un alimento que se utiliza para la preparación de las semillas.

Aceite comestible 85 ± 15%

Salsa de soja, trigo y otros piensos 83 ± 15%

Cerveza: 84 ± 15%

Vino, salsa de soya, vinagre... 87 ± 15%

3 Composición del kit

Placa de marcado de enzimas 96 agujeros

Solución estándar (cubierta negra): 1 ml cada una

0ppb,00,03 ppm,00,06 ppm,0.12 ppm,0.24 ppm,0.48 ppm

Solución estándar alta: 100 ppm 1 ml

Marcador de enzimas (capullo rojo)

Solución de trabajo de anticuerpos (capa azul) 5,5 ml

Solución de sustrato A (capuchón blanco) 6 ml

Substrato líquido B (capa negra) 6 ml

Solución de terminación (capuchón amarillo) 6 ml

20 X solución de lavado concentrada (cubierta blanca) 40 ml

Manual de instrucciones 1 copia

4 Equipo y reactivos requeridos

4.1 Aparatos: ensayo de aflatoxinas, impresora, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, oscilador, centrífuga, pipeta graduada, balanza (sensibilidad 0,01 g)

4.2 Micropipeta: de un solo canal 20 μl a 200 μl, de 100 μl a 1000 μl, de varios canales 300 μl

4.3 Reactivo: metanol, n-hexano, triclorometano o diclorometano

5 Tratamiento previo de la muestra

5.1 Instrucciones antes del tratamiento de las muestras:

El aparato experimental debe estar limpio y utilizar una cabeza de succión desechable para evitar la contaminación y la interferencia con los resultados experimentales.

5.2 Preparación de la solución

Solución 1: extracto de muestra

70% de metanol, es decir, V metanol: V agua desionizada=7:3.

5.3 Etapas de pretratamiento de las muestras:

5.3.1 Método de transformación de los cereales

1) Pesar 2 g de muestra triturada en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir 5 ml de solución de extracción de muestra, agitar durante 5 minutos, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 minutos del centro de separación;

2) Tomar 0,5 ml de supernatante, añadir 0,5 ml de agua desionizada y mezclar bien;

3) Tomar 50 μl de análisis.

Relación de dilución de la muestra: 5 Límite inferior de detección: 0,15 ppm

5.3.2 Métodos de procesamiento de muestras con una fuerte absorción de agua, como la cáscara de maíz y el salvado de trigo

1) Pesar 2 g de muestra triturada en un tubo de centrifugadora de 50 ml, añadir 20 ml de solución de extracción de muestra, agitar durante 5 minutos, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 minutos del centro de separación;

2) Tome 0,5 ml de supernatante, añada 0,5 ml de agua desionizada y mezcle bien; (Para la muestra con un contenido de toxinas extremadamente alto, se puede diluir con 35% de metanol y luego analizar.1 ml de la solución mezclada en 2) y 0.9 ml de metanol del 35% para mezclar. La relación de dilución de la muestra final es de 200 y el límite de detección es de 6ppb.)

3) Tomar 50 μl de análisis.

Ratio de dilución de la muestra: 20 Límite inferior de detección: 0,6 ppm

Nota: Debido a que la distribución de la toxina en la muestra es desigual, es necesario tomar muestras de múltiples puntos y mezclarlas completamente antes de tomar 2 g para el ensayo.

5.3.3 Método de procesamiento de los piensos para piensos

1) Pesar 2 g de muestra triturada en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir 10 ml de solución de extracción de muestra, agitar durante 5 minutos, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 minutos del centro de separación;

2) Tomar 0,5 ml de supernatante, añadir 0,5 ml de agua desionizada y mezclar bien;

3) Tomar 50 μl de análisis.

Ratio de dilución de la muestra: 10 Límites inferiores de detección: 0,3 ppm

5.3.4 Métodos de tratamiento para piensos de aceite comestible, maní y grasas altas

1) Pesar 2 g de muestra triturada en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir 8 ml de n-hexano y 10 ml de solución de extracción de muestra, agitar durante 5 min, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 min del centro de separación;

2) Retirar el líquido superior, tomar 0,5 ml del líquido inferior y añadir 0,5 ml de agua desionizada, mezclar bien, luego tomar 0,5 ml del líquido mezclado y añadir 0,5 ml de metanol 35%, agitar durante 30 s;

3) Tomar 50 μl de análisis.

Ratio de dilución de la muestra: 20 Límite inferior de detección: 0,6 ppm

5.3.5 Alimentos o condimentos como salsas, trigo, galletas, repostería y métodos de procesamiento de piensos como concentrado de piensos.

1) Pesar 2 g de muestra triturada en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir 10 ml de solución de extracción de muestra, agitar durante 5 minutos, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 minutos del centro de separación;

2) Tomar 2 ml de supernatante, añadir 4 ml de tricloro metano (o diclorometano), agitar durante 5 minutos, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 minutos del centro de separación;

3) Trasladar el líquido superior a otro recipiente, dejar el líquido inferior en espera, añadir otros 4 ml de cloroformo (o diclorometano) al líquido superior, agitar completamente y mezclar durante 5 minutos.y la temperatura ambiente es de 4000 rpm/centro de separación durante 10 minutos;

4) Retirar el líquido superior, mezclar el líquido inferior dos veces y mezclar completamente;

5) Se toman 2 ml del líquido inferior combinado y se secan con el aire a una temperatura de nitrógeno de 50-60 °C.

6) Añadir 0,5 ml de extracto de muestra para disolver completamente la sustancia seca, y luego añadir 0,5 ml de agua desionizada para mezclar;

7) Tomar 50 μl de análisis.

Ratio de dilución de la muestra: 10 Límites inferiores de detección: 0,3 ppm

5.3.6 Método de transformación de la cerveza

1) Mezclar completamente la cerveza (eliminar el CO2), tomar 2 ml de muestra de cerveza, añadir 1 ml de agua destilada, añadir 7 ml de metanol y agitar durante 5 minutos;

2) Tomar 0,5 ml de solución de muestra mezclada y añadir 0,5 ml de agua desionizada para mezclar bien;

3) Tomar 50 μl de análisis.

Ratio de dilución de la muestra: 10 Límites inferiores de detección: 0,3 ppm

5.3.7 Método de tratamiento del vino, la salsa de soja y el vinagre

1) Tomar 2 ml de muestra, añadir 2 ml de agua destilada, añadir 10 ml de triclorometano (o diclorometano), agitar durante 5 minutos, 4000 rpm a temperatura ambiente/10 minutos del centro de separación;

2) Tomar 1 ml del líquido inferior y secarlo con el soplo a una temperatura de nitrógeno de 50-60 °C;

3) Añadir 0,5 ml de extracto de muestra para disolver completamente la sustancia seca, luego añadir 0,5 ml de agua desionizada y mezclar bien;

5) Tomar 50 μl de análisis.

Relación de dilución de la muestra: 5 Límite inferior de detección: 0,15 ppm

6 etapas del ELISA

Sacar el reactivo requerido del ambiente de almacenamiento en frío a 4 °C y colocarlo a temperatura ambiente durante más de 30 minutos.Puede haber cristales que necesitan ser restaurados a temperatura ambiente para disolverse completamente cuando la solución de lavado se almacena en frío. Cada reactivo líquido debe agitarse antes de su uso. Sacar el número requerido de placas y marcos microporosos, colocar las placas microporosas no utilizadas en bolsas auto-sellables y conservarlas a 2-8 °C.

Antes del experimento, 20 × La solución de lavado concentrada se diluye en 20 veces en solución de lavado de trabajo.

6.1 Numeración: numerar los pozos correspondientes de la muestra y del estándar en secuencia, hacer dos orificios paralelos para cada muestra y estándar y registrar la posición del orificio estándar y del orificio de la muestra..

6.2 Reacción de adición de muestra: añadir 50 μl/pozo de muestra estándar o muestra en sus respectivos pozos, luego añadir 50 μl/pozo de marcador enzimático, luego añadir 50 μl/pozo de solución de trabajo de anticuerpos,sellar la placa con una membrana de la placa de cubierta, agitar suavemente durante 5 segundos, mezclar y reaccionar a 25 °C durante 30 minutos.

6.3 Lavado: quitar cuidadosamente la membrana de la placa de la cubierta, secar el líquido en el orificio, lavar completamente el orificio con una solución de lavado de 250 μl por orificio durante 5 veces, con un intervalo de 30 segundos,y seco con papel absorbente (las burbujas que no se eliminan después de la tapa se pueden perforar con una cabeza de pistola limpia).

6.4 Desarrollo del color: añadir 50 μl de solución de sustrato A y 50 μl de solución de sustrato B a cada orificio, agitar suavemente durante 5 segundos y mezclar bien, y desarrollar el color en la oscuridad a 25 °C durante 15 minutos.

6.5 Terminación: añadir 50 μl de solución de terminación a cada orificio, agitar suavemente y mezclar bien para terminar la reacción.

6.6 Medición del valor de absorción: utilizar el probador de aflatoxinas para medir el valor de absorción de cada orificio a 450 nm (se recomienda una longitud de onda doble 450/630 nm).La determinación se completará dentro de los 10 minutos siguientes a la finalización de la reacción.

6.7 El probador automático de aflatoxinas ST-2000A completa automáticamente la determinación y produce automáticamente los resultados.