Método de medición de la aflatoxina del maíz
La aflatoxina, abreviada como AFT en inglés, es un compuesto compuesto por un anillo difuranilo y cumarina (oxanaftotoquinona).,con un peso molecular de 312-346 y un punto de fusión de 200-300 °C. Tiene propiedades estables y resistentes a altas temperaturas y puede producir fluorescencia bajo luz ultravioleta de onda larga.Está dividido en B1, B2, G1, G2, M1, M2, P1, R1, GM, y alcoholes tóxicos de acuerdo con diferentes colores de fluorescencia, valores de RF y estructuras.
El AFT es insoluble en agua, etano, éter y éter de petróleo, pero fácilmente soluble en disolventes orgánicos como el metanol, el etanol, el cloroformo, el acetonitril y la dimetilformamida.El AFT puede descomponerse ligeramente en disolventes ácidos con un pH de 1-3, se descomponen y descomponen rápidamente en soluciones con un pH de 9-10, se descomponen rápidamente cuando se exponen a álcalis y se descomponen en sales casi no tóxicas en soluciones alcalinas con un pH de 9-10.Puede reducirse en condiciones ácidas..
Objetivo del experimento
La aflatoxina se refiere a algunas sustancias cancerígenas altamente tóxicas producidas por hongos.síntomas comunes de disfunción hepática como fiebreLa exposición prolongada a dosis bajas (20 microgramos/kg de peso corporal) puede aumentar significativamente el riesgo de cáncer de hígado, cáncer gástrico y otras enfermedades.Ya que está muy presente en cultivos y alimentos y representa un gran daño para los seres humanos y los animales, el establecimiento de métodos de detección rápidos y precisos es de gran importancia para garantizar la seguridad alimentaria y la salud pública.
El objetivo de este experimento es utilizar el principio del ensayo de inmunosorbente ligado a enzimas en fase sólida (ELISA), a saber, el ensayo de inmunosorbente ligado a enzimas (ELISA),para limitar y cuantificar el contenido de aflatoxina B1 en las muestras, que proporciona una base científica para la evaluación del riesgo de contaminación de los alimentos.
Aparatos de experimentación
1 analizador de micotoxinas ST-2000A
2 Maíz, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, oscilador, centrífuga, pipeta graduada, balanza (sensibilidad 0,01 g), micropipeta, reactivo de metanol, n-hexano, cloroformo o diclorometano
Procedimiento experimental
1 Compruebe si el equipo utilizado en el experimento está limpio, seco y libre de contaminación
2 Mezclar metanol y agua desionizada en una proporción de 7:3 para preparar la solución de extracción de la muestra
3 Tomar 2 g de muestra de maíz triturado y colocarla en un tubo centrífugo de 50 ml. Añadir 5 ml de solución de extracción de muestra y agitar durante 5 minutos a temperatura ambiente de 4000 rpm durante 10 minutos.toma 0.5 ml de supernatante y añadir 0.5 ml de agua desionizada.
4 Retirar los reactivos requeridos del ambiente refrigerado a 4 °C, dejarlos equilibrarse a temperatura ambiente durante 30 minutos y agitar bien.y diluir 20 veces la solución de lavado concentrada con agua desionizada para obtener la solución de lavado de trabajo.
5 Numerar los microporos correspondientes de la muestra y el estándar en secuencia, hacer 2 pozos paralelos para cada muestra y estándar y registrar las posiciones de los pozos estándar y de los pozos de muestra.Añadir 50 μl/pozo de muestra estándar o de muestra a sus microporos respectivos, luego añadir 50 μl/pozo de marcador enzimático, y luego añadir 50 μl/pozo de solución de trabajo de anticuerpos.Reaccionar a 25 °C durante 30 minutos.
Retirar la película de la cubierta, agitar el líquido dentro del orificio y lavar a fondo 5 veces con 250 μl de detergente de trabajo por orificio, con un intervalo de 30 segundos entre cada lavado.Utilice papel absorbente para secar
7 Añadir solución de sustrato A (50 μl) a cada pozo, seguido de solución de sustrato B (50 μl). Agitar durante 5 segundos y mezclar bien. Color a 25 °C en la oscuridad durante 15 minutos.
Añadir 50 μl de solución de terminación a cada pozo, agitar suavemente y mezclar bien para terminar la reacción.
9 Mide el valor de absorción de cada pozo a 450 nm con un analizador de aflatoxinas (se recomienda una doble longitud de onda 450/630 nm).La medición debe completarse dentro de los 10 minutos posteriores a la finalización de la reacción.
10 El instrumento completa la medición y proporciona automáticamente el resultado
Resultados experimentales
Después de la prueba, el contenido de aflatoxina de la muestra es de aproximadamente 0.19ug/kg, lo que cumple con la norma GB 2761-2017 "Estándar nacional de seguridad alimentaria para los límites de toxinas fúngicas en los alimentos".